影响电泳的因素:电场、溶液
不同的带电颗粒在同一电场中泳动的速度不同。常用泳动度(或迁移率)来表示。泳动度是指带电颗粒在单位电场强度下泳的速度。
一般说来,颗粒带净电荷多,直径小而接近于球形,则在电场中泳动速度快,反之则慢。泳动度还与分子的形状,介质粘度,颗粒所带电荷有关,泳动度与颗表面电荷成正比,与介质粘度及颗粒半径反比。带电荷的高分子在电解质溶液中把一些带有相反电荷的离子吸引在其周围,形成一离子扩散层。加以电场时,颗粒向符号相反的电极移动即带阳电荷颗粒移向负极,带阴电荷颗粒移向正移;离子扩散层由于带有过剩的与颗粒符号相反的电荷,可以向相反方向挪动。结果颗粒与离子扩散之间的静电
引力使颗粒的泳动度减慢,另外,高分了颗粒表面有一层水,在电场影响下,它与颗
电场强度也称电位梯度,是指单位长度(每一厘米)支持物体上的电位降,它对泳动度起着十分重要的作用。例如纸电泳。测量
一般,电场强度越高,带电颗粒移动速度越快。根据电场强度大小,可将电泳分为常压电泳和高压电泳,前者的电压在
时间需数小时至数天,高压电泳时间短,有时仅几分钟即可,高压电泳大多数都用在分离氨基酸,肽,核苷酸,由于电压升高,电压也随之增大,故需冷却装置。
值决定了带电颗粒解离的程度,也决定了物质所带净电荷的多少,对于蛋白质,氨基酸等两性电解质而言,溶液
值离电点越远,颗粒所带净电荷越多;电泳速度越快;反之则越慢。例如血清中几种主要蛋白质的等电点各不相同,白蛋白等电点是
溶液的离子强度是另一个重要选择的条件,在保持充足缓冲能力前提下,离子强
度要zui小。溶液的离子强度越高,带电颗粒泳动速度越慢,反之越快。浓度大的缓冲液在合适电压下,有较低的电阻和较大的电流,产热较高。如果这种额外的热可以驱散,高浓度的缓冲液扩散常数较低,可以产生较窄细的电泳区带。离子强度很高时要用低电压,避免过多产热,这样又导致长的电泳时间,以致增加变性和区带分离困难。
在支持物的电泳中,影响电泳的另一个主要的因素是电渗作用。所谓电渗就是指在电场中液体对固体支持物的相对移动,例如在
球蛋白与其他蛋白质一样带负电荷,应该向正极移动,然而它却向负极方向挪动,这就是电渗作用的结果。滤纸的纤维间具有大量孔隙带有负电荷,如一束毛细管,进行电泳时蛋白质通过这一些孔隙向前移动。纸的孔隙带有负电荷,与带电颗粒一样能吸引正离子,因此介质沿管壁相对地带的较多的正电荷。在电场中,带负电荷的蛋白质向正极移动,而介质却向反向阴极移动,从而对蛋白质颗粒的泳动起阻碍作用。由于
球蛋白分子颗粒大,净电荷较少,移动速度慢,电渗作用大于颗粒向前泳动的力,结果
小于分子向前移动的力,因此分子向前移。所以,血清蛋白质电泳后球蛋白反而在点样位置之后。
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