我敢打赌80%的试验人员都没有真实理解Western blot电泳的电路原理
在科研狗的Western blot评论群中,有位同学提出了如下十分深入和有水平的问题:
咱们议论纷繁,纷繁出谋划策。经过长达10个小时的剧烈评论之后(有那么久吗?不就10分钟不到),咱们总算得出共同定论:
首要,解说内槽是怎么漏液的咱们先来看下WB的相关常识,下图是很常见的电泳芯。留意图中赤色线条和黄色线条是设备上面的电极丝方位示意图。
正常情况下,内槽中的电泳液是高出玻璃短板的,因而电路回路中,电子e从负极动身,上升到上面,然后经过WB的聚丙烯酰氨凝胶,回到外槽液体中的正极,由于蛋白质带负电,所以也依照电子的跋涉途径移动。
如上图所示,内槽液体低于玻璃短板之后,电路回路被阻断,因而没有电流了,蛋白也就不跑了。
留意上图中红线所指的区域,有一个橡胶垫,橡胶垫的结构从旁边面看如上面有图所示。然后漏液的真理就在下图:
咱们在安顿胶板的时分很可能疏忽了上述的问题,没有将胶的玻璃短板紧紧触摸橡胶条,因而液体就渐渐从玻璃短板两头漏到外槽中,致使内槽中的液体缺乏,使得电回路断开。
在这里科研狗有一个经历是,在将两块胶板贴合在电泳芯中然后预备夹紧的时分在玻璃胶板的底部往上抵,这样就不会呈现上面那个小缝隙了。
很简单,桌面或许胶板不水平,左面高右边低,漏液的过程中,左面首要没有了液体,然后中止了跑动,从左往右渐渐没有了液体,因而是一个左高右低的斜线。
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